Forskrift om offentlig kontroll – animalsk produksjon, forordning (EU) 2019/624 og forordning (EU) 2019/627

Forordninger

Konsolidert forordning (EU) 2015/1375 om trikinkontroll

KOMMISJONENS GJENNOMFØRINGSFORORDNING (EU) 2015/1375
av 10. august 2015
om fastsettelse av særlige regler for offentlig kontroll av trikiner i kjøtt
(kodifisering)

Vedlegg I
Påvisningsmetoder

►M1

Kapittel I
Referansemetode for påvisning

►M5

1.Referansemetoden for påvisning ved undersøkelse av prøver for trikiner skal være ISO 18743:2015/Amd1:2023.
2.Følgende regler gjelder kun for undersøkelse av kjøtt fra tamsvin:
a.Fra hele skrotter av tamsvin, bortsett fra avlspurker og -råner, skal det tas en prøve på minst 1 g fra en av hovedmusklene i mellomgulvet ved overgangen til den senete delen. Det kan brukes en særlig trikintang forutsatt at en nøyaktighet på 1,00–1,15 g kan garanteres.

Fra hele skrotter av avlspurker og -råner skal det tas en større prøve på minst 2 g fra en av hovedmusklene i mellomgulvet ved overgangen til den senete delen.

I mangel av hovedmuskler fra mellomgulvet skal det tas en prøve på 2 g fra mellomgulvets ribbeinsdel eller brystbeinsdel eller fra tygge-, tunge- eller bukmuskulaturen hos tamsvin, bortsett fra avlspurker og -råner, og en prøve på 4 g fra de samme vevene fra avlspurker og -råner.

b.Fra stykningsdeler av kjøtt skal det tas en fettfattig prøve på minst 5 g fra den tverrstripede muskulaturen så nært bein eller sener som mulig. En prøve av samme størrelse skal tas fra kjøtt som ikke er beregnet på å bli grundig gjennomvarmet eller behandlet på andre måter etter slakting.

◄M5

◄M1

Kapittel II
Likeverdige metoder
A. Mekanisk støttet fordøyelsesmetode for undersøkelse av samleprøver/bunnfellingsmetode
1. Apparatur og reagenser
a.Kniv eller saks til prøvetaking.
b.Bakker inndelt i 50 kvadrater som hvert kan romme prøver på ca. 2 g kjøtt, eller andre hjelpemidler som gir likeverdig garanti med hensyn til prøvenes sporbarhet.
c.Kjøttkvern eller elektrisk blander.
d.En Stomacher laboratorieblander, modell 3 500 Thermo.
e.Plastposer som passer til Stomacher-blanderen.
f.2-liters koniske skilletrakter, helst med sikkerhetskraner av teflon.
g.Stativer, ringer og klemmer.
h.Siler med ytre diameter på 11 cm og netting i rustfritt stål eller messing med maskevidde på 180 µm.
i.Trakter med indre diameter på minst 12 cm, der silene skal settes inn.
j.Målesylindrer på 100 ml.

►M3

k.Et termometer med en nøyaktighet på 0,5 °C innenfor området 20–70 °C.

◄M3

l.En vibrator, f.eks. en barbermaskin der hodet er fjernet.
m.Et relé som slår seg av og på med intervaller på ett minutt.
n.Et trikinoskop med horisontalt bord eller et stereomikroskop med en lyskilde med gjennomfallende lys nedenfra og justerbar lysstyrke.

►M5

o.Petriskåler med en diameter på ca. 90 mm, inndelt i kvadrater på ca. 1 cm, eller tilsvarende utstyr for larvetelling i samsvar med nr. 6.14 i ISO 18743:2015/Amd1:2023.

◄M5

p.17,5 % saltsyre.

►M3

q.Pepsin med følgende styrke:
-i pulver- eller granulatform: 1:10 000 NF (US National Formulary), som tilsvarer 1:12 500 BP (British Pharmacopoeia) og 2 000 FIP (Fédération internationale de pharmacie), eller
-i flytende form: stabilisert pepsinløsning med minst 660 enheter/ml i henhold til Den europeiske farmakopé.

►M5

Andre pepsinaktivitetsnivåer kan også brukes, forutsatt at endelig aktivitet i fordøyelsesvæsken tilsvarer en aktivitet på 10 g med en styrke på 1:10 000 NF i samsvar med nr. 5.3 i ISO 18743:2015/Amd1:2023.

◄M5

◄M3

r.Et antall 10-liters bøtter som skal brukes når det foretas dekontaminering, f.eks. formalinbehandling, av apparaturen og av den resterende fordøyelsesvæsken i tilfelle positiv reaksjon.

►M3

s.Kalibrert vekt til veiing av prøver og/eller pepsin (nøyaktighet ± 0,1 g).

◄M3

►M3

2. Prøvetaking og mengde som skal fordøyes

►M5

Som fastsatt i nr. 4.2 i ISO 18743:2015/Amd1:2023 (se også vedlegg A og B til nevnte standard for nærmere opplysninger).

◄M5

◄M3

3. Framgangsmåte
I. Maling

Når kjøttprøvene males i en kjøttkvern på forhånd, blir fordøyelseskvaliteten bedre. Dersom det brukes en elektrisk blander, må den kjøres tre til fire ganger i ca. et sekund hver gang.

II. Fordøyelsesmetode

Denne metoden kan omfatte komplette samleprøver (100 g prøver samtidig) eller samleprøver på mindre enn 100 g.

a.Komplette samleprøver (100 prøver samtidig):
i.En dobbel plastpose plasseres i Stomacher 3 500-blanderen, og temperaturen stilles til 40–41 °C.
ii.1,5 l vann, forvarmet til 40–41 °C, helles i den innerste plastposen.
iii.Vannet i Stomacher-blanderen tilsettes 25 ml 17,5 % saltsyre.
iv.Det tilsettes 100 prøver som veier ca. 1 g hver (ved 25–30 °C), og som er tatt fra hver av enkeltprøvene i samsvar med nr. 2.
v.Til slutt tilsettes 6 g pepsin eller 18 ml pepsinløsning. Denne rekkefølgen må følges nøye for å unngå at pepsinet brytes ned.
vi.Innholdet i posen behandles i Stomacher-blanderen i 25 minutter.
vii.Plastposen tas ut av Stomacher-blanderen, og fordøyelsesvæsken filtreres gjennom silen og ned i et 3-liters begerglass.
viii.Plastposen skylles med ca. 100 ml vann, som deretter brukes til å skylle silen, og som til slutt tilsettes til filtratet i begerglasset.
ix.Opptil 15 enkeltprøver kan tilsettes til en samleprøve på i alt 100 prøver og undersøkes sammen med dem.
b.Mindre samleprøver (under 100 prøver)
i.En dobbel plastpose plasseres i Stomacher 3 500-blanderen, og temperaturen stilles til 40–41 °C.
ii.En fordøyelsesvæske framstilles ved å blande ca. 1,5 l vann og 25 ml 17,5 % saltsyre. Det tilsettes 6 g pepsin, og væsken blandes ved en temperatur på 40–41 °C. Denne rekkefølgen må følges nøye for å unngå at pepsinet brytes ned.
iii.Av fordøyelsesvæsken måles det opp en mengde som tilsvarer 15 ml per gram prøve (til 30 prøver kreves det f.eks. en mengde på 30 × 15 ml = 450 ml), og den helles over i den innerste plastposen sammen med kjøttprøvene som veier ca. 1 g (ved 25–30 C), og som er tatt fra hver av enkeltprøvene i samsvar med nr. 2.
iv.Vann med en temperatur på ca. 41 °C helles i den ytre plastposen, slik at den samlede væskemengden i de to plastposene blir 1,5 l. Innholdet i posen behandles i Stomacher-blanderen i 25 minutter.
v.Plastposen tas ut av Stomacher-blanderen, og fordøyelsesvæsken filtreres gjennom silen og ned i et 3-liters begerglass.
vi.Plastposen skylles med ca. 100 ml vann (ved 25–30 °C), som deretter brukes til å skylle silen og til slutt tilsettes til filtratet i begerglasset.

►M3

III. Påvisning av larver ved bunnfelling
-Fordøyelsesvæsken tilsettes is (300-400 g flakis, skjellis eller knust is), slik at væskemengden blir ca. 2 l. Fordøyelsesvæsken røres til isen har smeltet. Ved mindre samleprøver (se avsnitt II bokstav b)) reduseres ismengden tilsvarende.
-Den avkjølte fordøyelsesvæsken helles over i en 2-liters skilletrakt, utstyrt med en vibrator i en ekstra klemme.
-Væsken settes til bunnfelling i 30 minutter, mens bunnfellingstrakten vibreres i intervaller, dvs. ett minutts vibrasjon fulgt av ett minutts pause.
-Etter 30 minutter tappes en prøve på 60 ml av bunnfallet hurtig over i en målesylinder på 100 ml (etter bruk skylles trakten med et rengjøringsmiddel).
-La prøven på 60 ml stå i minst 10 minutter, og deretter suges supernatanten opp, slik at det blir igjen 15 ml som skal undersøkes for forekomst av larver.
-Til oppsuging kan det brukes en engangssprøyte utstyrt med et plastrør. Røret skal ha en slik lengde at 15 ml blir værende igjen i målesylinderen når flensen på sprøyten hviler på kanten av sylinderen.
-De resterende 15 ml helles over i en petriskål eller tilsvarende utstyr for larvetelling og undersøkes med trikinoskop eller stereomikroskop.
-Målesylinderen skylles med 5–10 ml springvann, og dette skyllevannet tilsettes i prøven.
-Fordøyelsesvæskene skal undersøkes så snart de er ferdige. Undersøkelsen skal ikke under noen omstendigheter utsettes til neste dag.

Dersom fordøyelsesvæskene er uklare, skal de klares på følgende måte:

-Den endelige prøven på 60 ml helles over i en målesylinder, der den hviler i 10 minutter. Deretter suges 45 ml av supernatanten opp, og de resterende 15 ml fylles opp til 45 ml med springvann.
-Etter nok en bunnfellingsperiode på 10 minutter suges 30 ml av supernatanten opp, og de resterende 15 ml helles over i en petriskål eller tilsvarende utstyr for larvetelling og undersøkes med trikinoskop eller stereomikroskop.
-Målesylinderen skylles med 10 ml springvann, og dette skyllevannet tilsettes i prøven i petriskålen eller tilsvarende utstyr for larvetelling og undersøkes med trikinoskop eller stereomikroskop.
IV. Positive eller usikre resultater

►M5

Dersom resultatet av undersøkelsen av en samleprøve er positivt eller usikkert, skal det tas en ytterligere prøve på 20 g fra hvert svin, som fastsatt i nr. 4.2 i ISO 18743:2015/Amd1:2023 (se også vedlegg A og B til nevnte standard for nærmere opplysninger). Prøvene på 20 g fra fem svin undersøkes samlet ved hjelp av metoden beskrevet i dette kapittelet. På denne måten undersøkes prøver fra 20 grupper, hver på fem svin. Dersom det påvises trikiner i en samleprøve fra fem svin, tas en ytterligere prøve på 20 g fra hvert dyr i gruppen, og hver prøve undersøkes enkeltvis ved hjelp av metoden beskrevet i dette kapittelet. Parasittprøver skal oppbevares i 70–90 % etanol (sluttkonsentrasjon) med henblikk på konservering og artsbestemmelse ved EU-referanselaboratoriet eller det nasjonale referanselaboratoriet. Dekontamineringsprosedyren er beskrevet nærmere i nr. 12 i ISO 18743:2015/Amd1:2023.

◄M5

◄M3

B. Mekanisk støttet fordøyelsesmetode for undersøkelse av samleprøver/filtreringsteknikk
1. Apparatur og reagenser

Som fastsatt i avsnitt A nr. 1.

Tilleggsutstyr:

a.En 1-liters Gelman-trakt med filterholder (diameter 45 mm).
b.Filterskiver som består av en rund netting i rustfritt stål med en maskevidde på 35 µm (skivens diameter: 45 mm), to 1 mm tykke gummiringer (ytre diameter: 45 mm, indre diameter: 38 mm), nettingen plasseres mellom de to gummiringene og festes ved hjelp av et tokomponentlim som egner seg for de to materialene.
c.En 3-liters erlenmeyerkolbe med et siderør til oppsuging.
d.En vannstrålepumpe.
e.Plastposer som rommer minst 80 ml.
f.Utstyr til forsegling av plastposene.
g.Rennilase, styrke 1:150 000 Soxhlet-enheter per gram.

►M3

2. Prøvetaking

►M5

Som fastsatt i nr. 4.2 i ISO 18743:2015/Amd1:2023 (se også vedlegg A og B til nevnte standard for nærmere opplysninger).

◄M5

◄M3

3. Framgangsmåte
I. Maling

Når kjøttprøvene males i en kjøttkvern på forhånd, blir fordøyelseskvaliteten bedre. Dersom det brukes en elektrisk blander, må den kjøres tre til fire ganger i ca. et sekund hver gang.

II. Fordøyelsesmetode

Denne metoden kan omfatte komplette samleprøver (100 g prøver samtidig) eller samleprøver på mindre enn 100 g.

a.Komplette samleprøver (100 prøver samtidig)

Se avsnitt A nr. 3 II bokstav a).

b.Mindre samleprøver (under 100 prøver)

Se avsnitt A nr. 3 II bokstav b).

III. Påvisning av larver ved filtrering
a.Fordøyelsesvæsken tilsettes is (300–400 g flakis, skjellis eller knust is), slik at væskemengden blir ca. 2 l. Ved mindre samleprøver reduseres ismengden tilsvarende.
b.Fordøyelsesvæsken røres til isen har smeltet. La den avkjølte fordøyelsesvæsken stå i ro i minst tre minutter, slik at larvene kan rulle seg sammen.
c.Gelman-trakten, utstyrt med filterholder og filterskive, monteres på erlenmeyerkolben, som koples til en vannstrålepumpe.
d.Fordøyelsesvæsken helles over i Gelman-trakten og filtreres. Når filtreringen nærmer seg slutten, kan vannstrålepumpen brukes til å suge med, for å få væsken til å passere lettere gjennom filteret. Sugingen må stanses rett før filteret blir tørt, dvs. når det er 2–5 ml væske igjen i trakten.
e.Når all fordøyelsesvæsken er filtrert, tas filterskiven ut og legges i en plastpose på 80 ml sammen med 15–20 ml rennilaseløsning. Rennilaseløsningen lages ved å tilsette 2 g rennilase til 100 ml springvann.
f.Plastposen forsegles to ganger og plasseres i Stomacher-blanderen mellom den indre og den ytre posen.
g.Stomacher-blanderen skal arbeide i tre minutter, enten det dreier seg om en komplett eller en mindre samleprøve.

►M3

h.Etter tre minutter tas plastposen med filterskiven og rennilaseløsningen ut av Stomacher-blanderen og åpnes med en saks. Væskeinnholdet helles over i en petriskål eller tilsvarende utstyr for larvetelling. Posen skylles med 5–10 ml vann, som deretter tilsettes i petriskålen eller tilsvarende utstyr for larvetelling og undersøkes med trikinoskop eller stereomikroskop.

◄M3

i.Fordøyelsesvæskene skal undersøkes så snart de er ferdige. Undersøkelsen skal ikke under noen omstendigheter utsettes til neste dag.
Merk:Det må aldri brukes filterskiver som ikke er helt rene. Urene skiver må aldri få lov til å tørke ut. Filterskiver kan rengjøres ved å legge dem i rennilaseløsning over natten. Før bruk skal de vaskes i frisk rennilaseløsning ved hjelp av Stomacher-blanderen.

►M3

IV. Positive eller usikre resultater

Som fastsatt i del A nr. 3 avsnitt IV.

◄M3

C. Automatisk fordøyelsesmetode for undersøkelse av samleprøver på opptil 35 g
1. Apparatur og reagenser
a.Kniv eller saks til prøvetaking.
b.Bakker inndelt i 50 kvadrater som hvert kan romme prøver på ca. 2 g kjøtt, eller andre hjelpemidler som gir likeverdig garanti med hensyn til prøvenes sporbarhet.
c.En Trichomatic 35®-blander med filtreringsinnsats.
d.Saltsyre 8,5 ± 0,5 % vekt.
e.Membranfiltre av gjennomsiktig polykarbonat med diameter på 50 mm og porestørrelse på 14 μm.

►M3

f.Pepsin med følgende styrke:
-i pulver- eller granulatform: 1:10 000 NF (US National Formulary), som tilsvarer 1:12 500 BP (British Pharmacopoeia) og 2 000 FIP (Fédération internationale de pharmacie), eller
-i flytende form: stabilisert pepsinløsning med minst 660 enheter/ml i henhold til Den europeiske farmakopé.

►M5

Andre pepsinaktivitetsnivåer kan også brukes, forutsatt at endelig aktivitet i fordøyelsesvæsken tilsvarer en aktivitet på 10 g med en styrke på 1:10 000 NF i samsvar med nr. 5.3 i ISO 18743:2015/Amd1:2023.

◄M5

◄M3

►M3

g.Kalibrert vekt til veiing av prøver og/eller pepsin (nøyaktighet ± 0,1 g)

◄M3

h.En pinsett med flat spiss.
i.Et antall objektglass med en sidelengde på minst 5 cm, eller et antall petriskåler med diameter på minst 6 cm, der undersiden er inndelt i kvadrater på 10 × 10 mm ved hjelp av et spisst redskap.
j.Et (stereo)mikroskop med gjennomfallende lys (forstørrelse 15–60 ganger) eller et trikinoskop med horisontalt bord.
k.En bøtte til oppsamling av flytende avfall.
l.Et antall 10-liters bøtter som skal brukes når det foretas dekontaminering, f.eks. formalinbehandling, av apparaturen og av den resterende fordøyelsesvæsken i tilfelle positiv reaksjon.

►M3

m.Et termometer med en nøyaktighet på 0,5 °C innenfor området 20–70 °C.

◄M3

►M3

2. Prøvetaking

►M5

Som fastsatt i nr. 4.2 i ISO 18743:2015/Amd1:2023 (se også vedlegg A og B til nevnte standard for nærmere opplysninger).

◄M5

◄M3

3. Framgangsmåte
I. Fordøyelsesmetode
a.Blanderen med filtreringsinnsatsen settes opp, og avfallsrøret koples til og føres fram til avfallsbøtten.
b.Når blanderen slås på, begynner oppvarmingen.
c.Før start åpnes og lukkes bunnventilen, som er plassert under reaksjonskammeret.
d.Det tilsettes opptil 35 prøver som veier ca. 1 g hver (ved 25–30 °C), og som er tatt fra hver av enkeltprøvene i samsvar med nr. 2. Store stykker av sener og bindevev må fjernes, ettersom de kan føre til at membranfilteret tetter seg.
e.Hell i vann opp til kanten av et væskekammer (på ca. 400 ml) som er koplet til blanderen.
f.Hell ca. 30 ml saltsyre (8,5 %) opp til kanten av det mindre væskekammeret som er koplet til blanderen.
g.Plasser et membranfilter under grovfilteret i filterholderen i filtreringsinnsatsen.
h.Til slutt tilsettes 7 g pepsin eller 21 ml pepsinløsning. Denne rekkefølgen må følges nøye for å unngå at pepsinet brytes ned.
i.Steng lokkene til reaksjons- og væskekamrene.
j.Velg fordøyelsestid. Velg kort fordøyelsestid (5 minutter) for svin i vanlig slaktealder og utvidet fordøyelsestid (8 minutter) for andre prøver.
k.Når det trykkes på startknappen på blanderen, starter prosessen med blanding og fordøyelse automatisk, etterfulgt av filtrering. Etter 10-13 minutter er prosessen ferdig og stanser automatisk.
l.Lokket til reaksjonskammeret åpnes etter at det er kontrollert at kammeret er tømt. Dersom det er skum eller rester av fordøyelsesvæske i kammeret, gjentas prosessen i samsvar med avsnitt V.
II. Påvisning av larver
a.Ta av filterholderen, og overfør membranfilteret til et objektglass eller en petriskål.
b.Membranfilteret undersøkes ved hjelp av et (stereo)mikroskop eller et trikinoskop.
III. Rengjøring av utstyret
a.Dersom resultatet er positivt, fylles reaksjonskammeret i blanderen to tredels fullt med kokende vann. Vanlig springvann helles i det tilkoplede væskekammeret til den nedre nivåføleren er dekket. Det automatiske rengjøringsprogrammet gjennomføres. Dekontaminer filterholderen og øvrig utstyr, f.eks. med formalin.
b.Ved arbeidsdagens slutt fylles væskekammeret i blanderen med vann, og det kjøres et standardprogram.
IV. Bruk av membranfiltre

Hvert membranfilter av polykarbonat kan brukes høyst fem ganger. Filteret skal snus før det brukes neste gang. Dessuten skal filteret hver gang det har vært brukt, undersøkes for eventuelle skader som kan gjøre det uegnet til ytterligere bruk.

V. Metode som skal brukes når fordøyelsen er ufullstendig og filtreringen ikke kan gjennomføres

Når den automatiske prosessen i blanderen er gjennomført i samsvar med avsnitt I, åpnes lokket til reaksjonskammeret, og det kontrolleres om det er skum eller væske igjen i kammeret. Dersom dette er tilfellet, utføres følgende punkter:

a.Steng bunnventilen under reaksjonskammeret.
b.Ta av filterholderen, og overfør membranfilteret til et objektglass eller en petriskål.
c.Legg et nytt membranfilter i filterholderen, og sett filterholderen på plass.
d.Fyll vann i væskekammeret i blanderen til den nedre nivåføleren er dekket.
e.Kjør det automatiske rengjøringsprogrammet.
f.Når rengjøringsprogrammet er ferdig, åpnes lokket til reaksjonskammeret, og det kontrolleres om det finnes væske igjen i kammeret.
g.Dersom kammeret er tomt, tas filterholderen av, og membranfilteret overføres ved hjelp av en pinsett til et objektglass eller en petriskål.
h.De to membranfiltrene undersøkes i samsvar med avsnitt II. Dersom filtrene ikke kan undersøkes, gjentas hele fordøyelsesprosessen med utvidet fordøyelsestid i samsvar med avsnitt I.

►M3

VI. Positive eller usikre resultater

Som fastsatt i del A nr. 3 avsnitt IV.

◄M3

D. Magnetrørermetode for undersøkelse av samlet fordøyelsesprøve ved filtreringsteknikk og påvisning av larver ved en lateksagglutinasjonstest

Denne metoden anses likeverdig bare ved undersøkelse av kjøtt fra tamsvin.

1. Apparatur og reagenser
a.Kniv eller saks og pinsett til prøvetaking.
b.Bakker inndelt i 50 kvadrater som hvert kan romme prøver på ca. 2 g kjøtt, eller andre hjelpemidler som gir likeverdig garanti med hensyn til prøvenes sporbarhet.
c.En blander med skarp hakkekniv. Dersom prøvene veier mer enn 3 g, må det brukes kjøttkvern med huller på 2–4 mm eller saks. Når det gjelder fryst kjøtt eller tunge (etter at hinnen som ikke kan fordøyes, er fjernet), er det nødvendig med kjøttkvern, og prøven må være betydelig større.
d.Magnetrørere med termostatregulert varmeplate og ca. 5 cm lange teflonbelagte rørestaver.
e.3-liters begerglass.
f.Siler med ytre diameter på 11 cm og netting i rustfritt stål eller messing med maskevidde på 180 µm.
g.Filtreringsapparat av stål for 20 µm nettingfilter, med ståltrakt.
h.Vakuumpumpe.
i.10–15-liters metall- eller plastbeholdere til oppsamling av fordøyelsesvæsken.
j.Roterende risteapparat med tredimensjonal (3D) bevegelse.
k.Aluminiumsfolie.
l.25 % saltsyre.

►M3

m.Pepsin med følgende styrke:
-i pulver- eller granulatform: 1:10 000 NF (US National Formulary), som tilsvarer 1:12 500 BP (British Pharmacopoeia) og 2 000 FIP (Fédération internationale de pharmacie), eller
-i flytende form: stabilisert pepsinløsning med minst 660 enheter/ml i henhold til Den europeiske farmakopé.

►M5

Andre pepsinaktivitetsnivåer kan også brukes, forutsatt at endelig aktivitet i fordøyelsesvæsken tilsvarer en aktivitet på 10 g med en styrke på 1:10 000 NF i samsvar med nr. 5.3 i ISO 18743:2015/Amd1:2023.

◄M5

◄M3

n.Springvann oppvarmet til 46–48 °C.

►M3

o.Kalibrert vekt til veiing av prøver og/eller pepsin (nøyaktighet ± 0,1 g).

◄M3

p.Pipetter i forskjellige størrelser (1, 10 og 25 ml), mikropipetter etter anvisning fra produsenten av lateksagglutinasjonstesten og pipetteholdere.
q.Filtre i nylon med maskevidde på 20 µm og en diameter som passer til filtreringssystemet.
r.Pinsett i plast eller stål, 10–15 cm lang.
s.15-ml erlenmeyerkolber.
t.En pistill med konisk spiss av teflon eller stål som passer i erlenmeyerkolbene.

►M3

u.Et termometer med en nøyaktighet på 0,5 °C innenfor området 20–70 °C.

◄M3

v.Lateksagglutinasjonsplate fra Trichin-L-antigenprøvesettet validert under kode nr. EURLP_D_001/2011.
w.Bufferløsning med konserveringsmiddel (prøveløsning) fra Trichin-L-antigenprøvesettet validert under kode nr. EURLP_D_001/2011.
x.Bufferløsning supplert med konserveringsmiddel (negativ kontroll) fra Trichin-L-antigenprøvesettet validert under kode nr. EURLP_D_001/2011.
y.Bufferløsning supplert med Trichinella spiralis-antigener og konserveringsmiddel (positiv kontroll) fra Trichin-L-antigenprøvesettet validert under kode nr. EURLP_D_001/2011.
z.Bufferløsning med polystyrenpartikler overtrukket med antistoffer supplert med konserveringsmiddel (latekskuler) fra Trichin-L-antigenprøvesettet validert under kode nr. EURLP_D_001/2011.
aa.Engangspinner.

►M3

2. Prøvetaking

►M5

Som fastsatt i nr. 4.2 i ISO 18743:2015/Amd1:2023 (se også vedlegg A og B til nevnte standard for nærmere opplysninger).

◄M5

◄M3

3. Framgangsmåte
I. For komplette samleprøver (100 g prøver samtidig)
a.Det tilsettes 16 ± 0,5 ml 25 % saltsyre (sluttkonsentrasjon 0,2 %) i et 3-liters begerglass som inneholder 2,0 liter ± 200 ml springvann oppvarmet til 46–48 °C. En rørestav plasseres i begerglasset, begerglasset settes på den forvarmede platen, og omrøringen påbegynnes.
b.10 ± 1 g pepsin i pulverform (eller 30 ± 3 ml pepsinløsning) tilsettes.
c.100–115 g prøver tatt i samsvar med nr. 2 hakkes i blanderen med 150 ± 15 ml forvarmet fordøyelsesbuffer.
d.Det hakkede kjøttet legges i et 3-liters begerglass som inneholder vann, pepsin og saltsyre.
e.Hakkeinnsatsen i blanderen senkes flere ganger ned i fordøyelsesvæsken i begerglasset, og blanderskålen skylles med en liten mengde fordøyelsesvæske for å fjerne alt kjøtt som henger fast.
f.Begerglasset dekkes med aluminiumsfolie.
g.Magnetrøreren skal innstilles slik at den holder en konstant temperatur på 44–46 °C gjennom hele prosessen. Under omrøringen skal fordøyelsesvæsken rotere raskt nok til at det dannes en dyp virvel, men uten at det spruter.
h.Fordøyelsesvæsken røres til kjøttpartiklene forsvinner (ca. 30 minutter). Deretter slås magnetrøreren av, og fordøyelsesvæsken helles gjennom silen og ned i bunnfellingstrakten. Det kan være nødvendig med lengre fordøyelsestid (høyst 60 minutter) ved behandling av visse typer kjøtt (tunge, viltkjøtt osv.).
i.Fordøyelsesprosessen anses som tilfredsstillende dersom høyst 5 % av prøvens opprinnelige vekt blir værende igjen i silen.
j.Nylonfilteret med maskevidde på 20 µm plasseres på filterholderen. Ståltrakten festes i filterholderen ved hjelp av låsesystemet, og stålsilen med maskevidde på 180 µm plasseres på trakten. Vakuumpumpen koples til filterstøtten og metall- eller plastbeholderen, for å samle opp fordøyelsesvæsken.
k.Magnetrøreren slås av, og fordøyelsesvæsken helles gjennom silen ned i filtreringstrakten. Begerglasset skylles med ca. 250 ml varmt vann. Skyllevæsken helles gjennom filtreringsstativet etter vellykket filtrering av fordøyelsesvæsken.
l.Filteret løftes opp ved å holde det i kanten med tangen. Filteret brettes minst fire ganger og plasseres i den koniske kolben på 15 ml. Den konisk kolben som velges, må passe til pistillen.
m.Filteret trykkes mot bunnen av den koniske kolben på 15 ml ved hjelp av pistillen, og deretter presses filteret kraftig sammen ved at pistillen, som er plassert inne i det sammenbrettede filteret etter produsentens anvisninger, føres fram og tilbake ca. 20 ganger.
n.0,5 ± 0,01 ml av prøveløsningen pipetteres over til den koniske kolben på 15 ml, og filteret jevnes ut med pistillen ved at denne forsiktig føres fram og tilbake i ca. 30 sekunder, idet brå bevegelser unngås for å unngå sprut, etter produsentens anvisninger.
o.Alle prøver, den negative kontrollen og den positive kontrollen, fordeles med pipette på de forskjellige feltene på agglutinasjonsplaten etter produsentens anvisninger.
p.Latekskulene pipetteres ned i hvert felt på agglutinasjonsplaten etter produsentens anvisninger, uten at de kommer i kontakt med prøven/prøvene og kontrollene. Latekskulene i hvert felt blandes deretter ved hjelp av en engangspinne til den ensartede væsken dekker hele feltet.
q.Agglutinasjonsplaten plasseres på 3D-risteapparatet og ristes i 10 ± 1 minutter etter produsentens anvisninger.
r.Etter tidsrommet angitt i produsentens anvisninger stanses ristingen, agglutinasjonsplaten plasseres på en plan flate, og resultatene av reaksjonen avleses umiddelbart, etter produsentens anvisninger. Ved en positiv prøve skal kulene ha dannet ansamlinger. Ved en negativ prøve skal løsningen forbli ensartet, uten ansamlinger av kuler.

►M3

►M5

II. Samleprøver på mindre enn 100 g som fastsatt i nr. 8 i ISO 18743:2015/Amd1:2023.

◄M5

Om nødvendig kan opptil 15 g tilsettes i en samleprøve på 100 g og undersøkes sammen med disse prøvene i samsvar med avsnitt I. Over 15 g må undersøkes som en hel samleprøve. For samleprøver på opptil 50 g kan fordøyelsesvæsken og bestanddelene reduseres til 1 liter vann, 8 ml saltsyre og 5 g pepsin.

III. Positive eller usikre resultater

►M5

Dersom resultatet av undersøkelsen med lateksagglutinasjon av en samleprøve er positivt eller usikkert, skal det tas en ytterligere prøve på 20 g fra hvert svin, i samsvar med nr. 4.2 i ISO 18743:2015/Amd1:2023 (se også vedlegg A og B til nevnte standard for nærmere opplysninger). Prøvene på 20 g fra fem svin samles og undersøkes ved hjelp av metoden beskrevet i avsnitt I. På denne måten skal prøver fra 20 grupper à fem svin undersøkes.

◄M5

Når en undersøkelse med lateksagglutinasjon av en gruppe på fem svin gir et positivt resultat, skal det samles inn prøver på 20 g fra det enkelte svin i gruppen, og hver prøve skal undersøkes separat ved hjelp av metoden beskrevet i avsnitt I.

►M5

Når en undersøkelse med lateksagglutinasjon gir et positivt eller usikkert resultat, må minst 20 g svinemuskel sendes til det nasjonale referanselaboratoriet for bekreftelse i henhold til ISO 18743:2015/Amd1:2023 eller en av de likeverdige metodene beskrevet ovenfor.

◄M5

Parasittprøver skal oppbevares i 70–90 % etanol (sluttkonsentrasjon) med henblikk på konservering og artsbestemmelse ved EU-referanselaboratoriet eller det nasjonale referanselaboratoriet.

Etter innsamling av parasitter skal væsker med positive funn dekontamineres ved oppvarming til minst 60 °C.

◄M3

IV. Rengjørings- og dekontamineringsrutiner etter et positivt eller usikkert resultat

Dersom resultatet av undersøkelsen med lateksagglutinasjon av en samleprøve eller enkeltprøve er positivt eller usikkert, må alt materiale som har vært i kontakt med kjøtt (blanderskål og -kniv, pistill, begerglass, rørestav, temperaturføler, konisk filtertrakt, sil og tang), dekontamineres omhyggelig ved å dyppes i varmt vann (65–90 °C) i noen sekunder. Kjøttrester eller inaktiverte larver som måtte være igjen på overflaten, kan fjernes med en ren svamp og springvann. Om nødvendig kan noen dråper rengjøringsmiddel tilsettes for å avfette utstyret. Det anbefales deretter å skylle hver del omhyggelig for å fjerne alle rester av rengjøringsmiddelet.

E. Undersøkelse med kunstig fordøyelse for in vitro-påvisning av trikinlarver i kjøttprøver, PrioCHECK® Trichinella AAD Kit

Denne metoden anses likeverdig bare ved undersøkelse av kjøtt fra tamsvin.

PrioCHECK® Trichinella AAD Kit skal brukes i samsvar med bruksanvisningen for settet ved hjelp av skilletrakter (Lenz NS 29/32) og et reagensglass på 80 ml.

►M5

F. Automatisk påvisning av Trichinella spp. med metoden lumiVAST Trichinella

Denne metode skal bare anses som likeverdig for undersøkelse av kjøtt fra tamsvin.

Tillaging og analysering av prøver skal utføres i samsvar med produsentens anvisninger. Alle apparater som brukes til denne metoden, skal kalibreres og vedlikeholdes i samsvar med produsentens/produsentenes anvisninger.

Dersom resultatet av undersøkelsen av en samleprøve er positivt eller usikkert, skal det tas en ny prøve på 20 g fra en hovedmuskel i mellomgulvet eller annet vev fra hvert svin i samsvar med kapittel I.

Prøvene på 20 g fra fem svin skal slås sammen og undersøkes med samme metode.

Dersom det oppnås et positivt resultat fra en gruppe på fem svin, skal det tas nok en prøve på 20 g fra de enkelte dyrene i gruppen, og hver prøve skal undersøkes separat med samme metode.

Dersom det oppnås et positivt eller usikkert resultat, skal minst 20 g svinemuskel sendes til det nasjonale referanselaboratoriet for bekreftelse ved hjelp av referansemetoden angitt i kapittel I.

Parasittprøver skal oppbevares i 70–90 % etanol med henblikk på konservering og artsbestemmelse ved EUS referanselaboratorium eller det nasjonale referanselaboratoriet.

◄M5